公告信息：
樣品經(jīng)適當(dāng)?shù)妮腿『?，采用高效液相色譜法(HPLC)，選擇TBHQ、PG、OG、BHA、BHT的甲醇溶液最佳吸收波長280nln，采用甲醇和1％乙酸溶液梯度洗脫的方法進(jìn)行檢測(cè)。本研究建立了一種高效液相色譜簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確測(cè)定油脂中5種常用抗氧化劑的方法，該方法能有效分離檢測(cè)TBHQ、PG、OG、BHA和BHT等5種常用抗氧化劑，使用溶劑量少、檢測(cè)效率高、檢測(cè)限低，能滿足食用植物油中抗氧化劑的檢測(cè)。
1材料與方法
1．1材料與試驗(yàn)儀器
1．1．1儀器
日本島津20ATVP(附紫外檢測(cè)器)
1．1．2材料
食用調(diào)和油；TBHQ、PG、OG、BHA、BHT購于美國AccuStandard公司。無水乙醇、乙腈，分析純；丙酮、乙酸、正己烷、甲醇，色譜純；超純水。
標(biāo)準(zhǔn)溶液：(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液A：準(zhǔn)確稱取100mg
TBHQ，用甲醇溶解并定容至100mL，此溶液濃度為1mg／mL，溶液避光低溫保存；(2)標(biāo)準(zhǔn)溶液B：分別準(zhǔn)確稱取100mgBHA、BHT、PG和OG，用甲醇溶解并定容至100mL，此溶液中PG、BHA、OG和BHT濃度分別為1mg／n~，溶液避光低溫保存；(3)標(biāo)準(zhǔn)溶液A+B：分別準(zhǔn)確移取一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液A與B至10mL容量瓶中，用甲醇定容，分別配制得到O．01、0．02、0．05、0．08、0．10mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。由于5種組份的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，標(biāo)準(zhǔn)溶液A+B使用前配制。
1．2方法
1．2．1色譜條件表2不同提取溶劑對(duì)抗氧化劑回收率的影響(％)色譜柱，C18不銹鋼柱(德國默克公司，150mm~4．6ITI1TI，5urn)柱溫：35℃；檢測(cè)波長：280nnl；流速：1．0mL／min；進(jìn)樣量：5。
1．2．2樣品處理
準(zhǔn)確稱取1．0g油樣，置于10mL離心管中，加入溶劑溶解，混勻后，冰水冷卻后，以3000r／min離心15min，吸取上清液于圓底燒瓶中，按要求重復(fù)幾次，合并上清液，濃縮后用甲醇定容至10mL，過0．45岫過濾器后進(jìn)高效液相色譜儀測(cè)定。
2結(jié)果與討論
2．1檢測(cè)波長的選擇
試驗(yàn)分別對(duì)5種目標(biāo)物質(zhì)的甲醇溶液進(jìn)行了紫外掃描，結(jié)合查閱歷史文獻(xiàn)等資料，最終確定這5種目標(biāo)物質(zhì)的甲醇溶液的最佳檢測(cè)波長在280am。
2．2分離條件的選擇
通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用無梯度的甲醇／水作流動(dòng)相不能將這5種目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行了分離，如果梯度洗脫的話，雖可同時(shí)分離這5種目標(biāo)物質(zhì)，但PG的拖尾峰很厲害，因此實(shí)驗(yàn)了不同配比的甲醇／水、乙腈／水和甲醇／乙酸，結(jié)合國內(nèi)外資料，在總結(jié)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上最終優(yōu)選出流動(dòng)相設(shè)定條件如表1，在此條件下不但能很好分離出這5種目標(biāo)物，而且能夠?qū)崿F(xiàn)樣品中的干擾成分與目標(biāo)物有效分離。
2. 3提取溶劑的選擇
本研究采用了甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙腈作為提取溶劑，比較了它們的提取效果，試驗(yàn)結(jié)果列于表2。結(jié)果表明甲醇、乙醇、乙腈的回收率都不錯(cuò)，回收率分別在90．6％~95．3％、89．9~／o~94．9％、90．8％~96．8％，而丙酮的效果最差，回收率只有71．7％~78．5％，但考慮到乙腈的毒性比較強(qiáng)，最終篩選出甲醇作為提取溶劑。
2．4不同體積的選擇
實(shí)驗(yàn)中分別設(shè)置了5mL、5mL+5mL、5mL+5mL+5mL、10mL(其中提取體積為10mL時(shí)放在5OmL離心管中提取)幾種提取方式，從提取的效果(見表3)來看，5mL和10mL的提取效果不太好，尤其是10mL甲醇提取液放在50mL離心管中提取的效果更差，BHT的回收率只有75．4％，其中5mL+5mL和5mL+5mL+5mL的回收率分別達(dá)到9O．7％、6．7％、90．9％、7．1％，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，分別進(jìn)行兩次以上效果比較好，但是隨著提取次數(shù)的增加，不但實(shí)驗(yàn)過程復(fù)雜、浪費(fèi)溶劑，而且回收率提高的也不明顯，因此實(shí)驗(yàn)最終確定5mL+5mL作為提取方式。
2．5不同提取方式的選擇
實(shí)驗(yàn)中分別采用手動(dòng)混勻、渦旋振蕩、超聲處理和搖床振蕩四種提取方式進(jìn)行提取效果的比較(見表4)，通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)渦旋振蕩的提取回收率最好，分別達(dá)到92．2％~97．4％。
2．6不同時(shí)間的選擇
實(shí)驗(yàn)中分別設(shè)置渦旋振蕩2rain、5min、10min、30rain，結(jié)果見表5，從表5看出其中振蕩2min的提取回收率最低，隨著振蕩時(shí)間的延長，提取回收率逐漸增加，但是超過10min后回收率的提高已經(jīng)不明顯了，所以實(shí)驗(yàn)中確定渦旋振蕩10min為最佳時(shí)間。
2．7檢出限和線性范圍
配制的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，以組份的峰面積為縱坐標(biāo)，組份的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。濃度在0．02M)．10pJL范圍內(nèi)，TBHQ、PG、OG、BHA、BHT的標(biāo)準(zhǔn)曲線都有很好的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限見表6。
2．8回收率
采用上述建立的方法進(jìn)行5種抗氧化劑在食用植物油中的添加回收試驗(yàn)，稱取1．0g樣品，加入適量標(biāo)樣，使被加樣品的5種抗氧化劑的濃度分別在0．02g&g、0．05g／l【g、0．10g水平上，然后按實(shí)驗(yàn)最終確定的方法進(jìn)行提取實(shí)驗(yàn)，最終進(jìn)樣測(cè)定，實(shí)驗(yàn)設(shè)置6次重復(fù)，分別進(jìn)行回收率和精密度的計(jì)算。空白樣品、標(biāo)準(zhǔn)樣品及添加回收色譜圖如圖1，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7。從表7中可以看出，在三個(gè)水平上的5種抗氧化劑的回收率在90．7％~102．0％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0．24~／~2．50％之間，方法是可靠的。
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