DHA，即二十二碳六烯酸，俗稱腦黃金，是一種對(duì)人體非常重要的多不飽和脂肪酸，屬于w-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。DHA是神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞生長(zhǎng)及維持的一種主要物質(zhì)，是大腦和視網(wǎng)膜的重要構(gòu)成成分，在人體大腦皮層中含量高達(dá)20％，在眼睛視網(wǎng)膜中所占比例最大，約占50％。它對(duì)人的視覺(jué)形成、大腦活動(dòng)、心腦血管疾病、免疫功能及老年性癡呆癥均有極大影響。在兒童期DHA有助于腦神經(jīng)細(xì)胞間突觸聯(lián)系的增加，在老年期DHA則有助于延緩大腦萎縮、改善記憶力減退。當(dāng)DHA缺乏時(shí)，可引發(fā)生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、不育、皮膚異常鱗屑、智力障礙、免疫力低下甚至癌變等一系列癥狀。
　　
　　隨著我國(guó)油脂產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展，市場(chǎng)上出現(xiàn)了一些新型調(diào)和油，DHA食用調(diào)和油產(chǎn)品在市場(chǎng)上迅速推廣并且在消費(fèi)者中得到廣泛認(rèn)可，與產(chǎn)品得到迅速發(fā)展形成鮮明對(duì)比的是，相關(guān)DHA食用調(diào)和油產(chǎn)品的DHA含量檢測(cè)方法卻處于停滯狀態(tài)。因此，開(kāi)展對(duì)DHA食用調(diào)和油中DHA含量檢測(cè)方法的研究，可進(jìn)一步規(guī)范和服務(wù)DHA食用調(diào)和油的發(fā)展。
　　
　　目前國(guó)內(nèi)外測(cè)定油中DHA的常用色譜方法分為內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法。國(guó)標(biāo)方法如GB／T5009．168-2003(食品中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的測(cè)定)、GB／T17377-2008(動(dòng)植物油脂脂肪酸甲酯的氣相色譜分析)、GB／T5413．27—2010(嬰幼兒配方食品和乳粉DHA、EPA的測(cè)定)等均采用外標(biāo)法。國(guó)際上測(cè)定DHA的方法如AOCS Official Meth—od Ce 1b-89(用氣液色譜法測(cè)定海洋魚(yú)油中脂肪酸組成)、AOAC Official Method 991．39(氣相色譜法微膠囊魚(yú)油和甲酯、乙酯魚(yú)油中脂肪酸的測(cè)定)、AOAC Official Method 996．06(食品中脂肪酸的測(cè)定)等均采用內(nèi)標(biāo)法來(lái)測(cè)定DHA或其他脂肪酸含量。
　　
　　本文采用氣相色譜法測(cè)定海藻油和DHA調(diào)和油中DHA的含量，并將GB/T5009．168、AOCS Official Method Ce 1b-89和GB／T173773種方法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，以期找出最合適的DHA含量測(cè)定方法。
　　
　　1材料與方法
　　
　　1．1實(shí)驗(yàn)材料
　　
　　DHA標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99％)、C23:0甲酯標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99％)：購(gòu)自成都博奧生物科技公司；海藻油(DHA含量37．0％)：Martek Biosciences Corpora—tion Columbia，USA；DHA調(diào)和油：自制；正己烷、甲醇、氫氧化鈉、氯化鈉、異辛烷、無(wú)水硫酸鈉、鹽酸，均為分析純。
　　
　　1．2實(shí)驗(yàn)設(shè)備
　　
　　島津GC一2010 Plus氣相色譜儀，R-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，SHB—B95型循環(huán)水式多用真空泵，Sartori-us BS 224S分析天平。
　　
　　1．3實(shí)驗(yàn)方法
　　
　　以海藻油為原料調(diào)配DHA調(diào)和油，首先根據(jù)海藻油中DHA的含量，調(diào)配出DHA含量為200mg/kg的食用調(diào)和油，以此進(jìn)行DHA檢測(cè)方法的研究。
　　
　　1．4測(cè)定方法
　　
　　1．4．1GB／T 5009．168測(cè)定海藻油及DHA調(diào)和油中的DHA含量
　　
　　1．4．1．1前處理
　　
　　稱取1g油樣于50mL具塞容量瓶中，加人10mL正己烷輕搖使油樣溶解。吸取此溶液1～5mL于具塞比色管中，加入2mol／L氫氧化鉀甲醇溶液1mL，充分振蕩10min后放人60℃水浴加熱1～2min，冷卻到室溫，待甲酯化用。加入2mol／L鹽酸甲醇溶液2mL，充分振蕩10min，并于50℃加熱2min，棄去下層液體，再加約2mL蒸餾水洗凈并去除水層，用滴管吸出正己烷層，移至另一裝有無(wú)水硫酸鈉的漏斗中脫水，脫水后的溶液在70℃水浴上加熱濃縮，定容至1mL，待上機(jī)分析。
　　
　　1．4．1．2色譜條件
　　
　　PEG-20M毛細(xì)管脂肪酸分析柱(30m×0.53mmx1um)，氫離子火焰檢測(cè)器(FID)溫度220攝氏度，進(jìn)樣口溫度210℃，柱溫185攝氏度，載氣(He)流速6．0mL／min，氫氣流速40mL／min，空氣流速400mL／min。
　　
　　1．4．2GB／T17377測(cè)定海藻油及DHA調(diào)和油中的DHA含量
　　
　　1．4．2．1前處理
　　
　　稱取350mg油樣加人50mL燒瓶中，移取6mL0．5mol／L氫氧化鈉甲醇溶液于油樣中，并加入幾粒沸石，連接回流裝置，開(kāi)始加熱回流，回流過(guò)程中不斷搖動(dòng)燒瓶；當(dāng)燒瓶?jī)?nèi)油珠消失，溶液變得透明時(shí)，從冷凝器上端加7mL15％三氟化硼甲醇溶液于燒瓶?jī)?nèi)，繼續(xù)回流1min；然后從冷凝管上端加入4mL異辛烷，再回流1min；撤離熱源，取出燒瓶，向燒瓶中加入5mL飽和氯化鈉溶液，輕輕上下顛倒數(shù)次后，靜置分層；將異辛烷提取物集中在一起，并加入適量的無(wú)水硫酸鈉以去除痕量的水分，濃縮至1mL，待上機(jī)分析。
　　
　　1．4．2．2色譜條件
　　
　　聚酯毛細(xì)管色譜柱(30 m × 0.53 mm x 1 um)，氫離子火焰檢測(cè)器(FID)溫度230攝氏度，進(jìn)樣口溫度210℃，柱溫180℃，載氣(He)流速5．0mL／min，氫氣流速70mL／min，空氣流速400ml/min。
　　
　　1．4．3 AOCS Official Method Ce lb-89測(cè)定海藻油及DHA調(diào)和油中的DHA含量
　　
　　1．4．3．1前處理
　　
　　精確稱取約25mg的C23:0甲酯內(nèi)標(biāo)物于25mL容量瓶，然后用異辛烷定容，吸取1mL的內(nèi)標(biāo)液加入試管中并把溶劑蒸發(fā)，將試管冷凍保藏(不立即使用時(shí))；精確稱取25mg油樣加入含有內(nèi)標(biāo)物的試管，添加1．5mL0．5mol／L氫氧化鈉甲醇溶液，蓋緊蓋子，振搖并加熱到100℃保持5min；冷卻，添加2mL15％三氟化硼甲醇溶液，充氮保護(hù)，蓋緊蓋子，振搖并加熱到100℃保持30min；冷卻到30～40，添加1mL異辛烷，充氮保護(hù)，加蓋，振搖或者激烈搖晃30S；立即加人5mL飽和氯化鈉溶液，充氮，加蓋并激烈振搖；冷卻到室溫，當(dāng)異辛烷層和水層分離后，將異辛烷層轉(zhuǎn)移到干凈的試管中，充氮，加蓋；再用1mL異辛烷提取水相；將異辛烷提取液集中在一起，濃縮至1mL，待上機(jī)分析。
　　
　　1．4．3．2色譜條件
　　
　　Supercowax-10毛細(xì)管脂肪酸分析柱(30 m x 0.32 mm x 0.25 m)；氫離子火焰檢測(cè)器(FID)溫度270℃；進(jìn)樣口溫度250攝氏度，柱箱起始溫度170攝氏度，保持0min，程序升溫至225℃，保持0min，升溫速率1.0攝氏度／min；載氣(He)流速6．0mL／min，氫氣流速40mL／min，空氣流速400ml/min。
　　
　　2結(jié)果與討論
　　
　　2．1 3種方法測(cè)定海藻油中的DHA
　　
　　對(duì)海藻油進(jìn)行脂肪酸檢測(cè)，由于海藻油中DHA含量較高，3種方法都能比較準(zhǔn)確地檢測(cè)DHA的含量，經(jīng)檢測(cè)海藻油中DHA含量為36．6％～37．1％(見(jiàn)表1)，與Martek提供的數(shù)據(jù)一致。圖1為采用GB／T5009．168方法檢測(cè)海藻油中DHA含量的色譜圖。

　　2．23種方法測(cè)定調(diào)和油中的DHA
　　
　　圖2為GB／T5009．168方法檢測(cè)的色譜圖。圖2可見(jiàn)，可以檢測(cè)到DHA峰，DHA調(diào)和油中DHA由出峰時(shí)間為29．212min，峰分離情況良好。

　　
　　圖3為GB／T17377方法檢測(cè)的色譜圖。由圖3可見(jiàn)，圖中沒(méi)有檢測(cè)到DHA峰。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，反復(fù)進(jìn)樣，仍然檢測(cè)不到DHA，說(shuō)明該方法不適用于DHA含量較低樣品的檢測(cè)。

　　
　　圖4為AOCS Official Method Ce lb-89法測(cè)定DHA調(diào)和油中DHA含量的色譜圖。由圖4可知，DHA調(diào)和油中DHA的出峰時(shí)間為29．531min。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，測(cè)定穩(wěn)定性較差，該法采用內(nèi)標(biāo)法，操作程序較為麻煩，尋找合適的內(nèi)標(biāo)物也很困難。因此，該方法不用于DHA含量低的DHA食用調(diào)和油的檢測(cè)。

　　
　　綜上所述，對(duì)于DHA含量較高的海藻油，3種方法都能比較準(zhǔn)確地檢測(cè)DHA含量，而對(duì)于DHA含量較低的DHA食用調(diào)和油，GB／T17377方法未能有效檢測(cè)到DHA，而AOCS Official Method Ce 1b-89法穩(wěn)定性較差，并采用內(nèi)標(biāo)法，操作程序較為麻煩，尋找合適的內(nèi)標(biāo)物也很困難。因此，選擇GB／T5009．168方法作為DHA食用調(diào)和油中DHA含量的檢測(cè)方法，該法峰分離情況良好，采用外標(biāo)法，操作簡(jiǎn)便、易行、安全。
　　
　　2．3DHA標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
　　
　　根據(jù)GB／T5009．168方法，采用DHA作為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行分析檢測(cè)，以DHA質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)圖5。

　　
　　DHA標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=926 263X-23140，R2=0.9998該標(biāo)準(zhǔn)曲線在DHA含量為(0～1.0)×10mg／kg范圍內(nèi)線性良好。
　　
　　2．4測(cè)定DHA調(diào)和油中DHA的含量
　　
　　根據(jù)GB／T5009．168方法，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定調(diào)和油中的DHA含量。結(jié)果表明，調(diào)和油中DHA含量測(cè)定結(jié)果在190-210mg／kg之間，在誤差范圍之內(nèi)，并經(jīng)反復(fù)驗(yàn)證，對(duì)于不同范圍低含量的DHA食用調(diào)和油，可準(zhǔn)確檢測(cè)其DHA含量，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
　　
　　3結(jié)論
　　
　　對(duì)GB／T5009．168、GB／T17377、AOCS Official Method Ce lb-89測(cè)定方法比較可以看出，對(duì)于DHA含量較高的海藻油，3種方法均能準(zhǔn)確檢測(cè)出其中的DHA含量；而對(duì)于DHA含量較低的DHA食用調(diào)和油，GB／T5009．168方法則準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，并且采用外標(biāo)測(cè)定法，相對(duì)比較簡(jiǎn)單易操作，能較好地滿足DHA食用調(diào)和油中低含量的DHA檢測(cè)需求