DHA，即二十二碳六烯酸，俗稱腦黃金，是一種對人體非常重要的多不飽和脂肪酸，屬于w-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。DHA是神經(jīng)系統(tǒng)細胞生長及維持的一種主要物質(zhì)，是大腦和視網(wǎng)膜的重要構(gòu)成成分，在人體大腦皮層中含量高達20％，在眼睛視網(wǎng)膜中所占比例最大，約占50％。它對人的視覺形成、大腦活動、心腦血管疾病、免疫功能及老年性癡呆癥均有極大影響。在兒童期DHA有助于腦神經(jīng)細胞間突觸聯(lián)系的增加，在老年期DHA則有助于延緩大腦萎縮、改善記憶力減退。當DHA缺乏時，可引發(fā)生長發(fā)育遲緩、不育、皮膚異常鱗屑、智力障礙、免疫力低下甚至癌變等一系列癥狀。
　　
　　隨著我國油脂產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展，市場上出現(xiàn)了一些新型調(diào)和油，DHA食用調(diào)和油產(chǎn)品在市場上迅速推廣并且在消費者中得到廣泛認可，與產(chǎn)品得到迅速發(fā)展形成鮮明對比的是，相關(guān)DHA食用調(diào)和油產(chǎn)品的DHA含量檢測方法卻處于停滯狀態(tài)。因此，開展對DHA食用調(diào)和油中DHA含量檢測方法的研究，可進一步規(guī)范和服務(wù)DHA食用調(diào)和油的發(fā)展。
　　
　　目前國內(nèi)外測定油中DHA的常用色譜方法分為內(nèi)標法和外標法。國標方法如GB／T5009．168-2003(食品中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的測定)、GB／T17377-2008(動植物油脂脂肪酸甲酯的氣相色譜分析)、GB／T5413．27—2010(嬰幼兒配方食品和乳粉DHA、EPA的測定)等均采用外標法。國際上測定DHA的方法如AOCS Official Meth—od Ce 1b-89(用氣液色譜法測定海洋魚油中脂肪酸組成)、AOAC Official Method 991．39(氣相色譜法微膠囊魚油和甲酯、乙酯魚油中脂肪酸的測定)、AOAC Official Method 996．06(食品中脂肪酸的測定)等均采用內(nèi)標法來測定DHA或其他脂肪酸含量。
　　
　　本文采用氣相色譜法測定海藻油和DHA調(diào)和油中DHA的含量，并將GB/T5009．168、AOCS Official Method Ce 1b-89和GB／T173773種方法測定結(jié)果進行對比，以期找出最合適的DHA含量測定方法。
　　
　　1材料與方法
　　
　　1．1實驗材料
　　
　　DHA標準品(純度≥99％)、C23:0甲酯標準品(純度≥99％)：購自成都博奧生物科技公司；海藻油(DHA含量37．0％)：Martek Biosciences Corpora—tion Columbia，USA；DHA調(diào)和油：自制；正己烷、甲醇、氫氧化鈉、氯化鈉、異辛烷、無水硫酸鈉、鹽酸，均為分析純。
　　
　　1．2實驗設(shè)備
　　
　　島津GC一2010 Plus氣相色譜儀，R-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，SHB—B95型循環(huán)水式多用真空泵，Sartori-us BS 224S分析天平。
　　
　　1．3實驗方法
　　
　　以海藻油為原料調(diào)配DHA調(diào)和油，首先根據(jù)海藻油中DHA的含量，調(diào)配出DHA含量為200mg/kg的食用調(diào)和油，以此進行DHA檢測方法的研究。
　　
　　1．4測定方法
　　
　　1．4．1GB／T 5009．168測定海藻油及DHA調(diào)和油中的DHA含量
　　
　　1．4．1．1前處理
　　
　　稱取1g油樣于50mL具塞容量瓶中，加人10mL正己烷輕搖使油樣溶解。吸取此溶液1～5mL于具塞比色管中，加入2mol／L氫氧化鉀甲醇溶液1mL，充分振蕩10min后放人60℃水浴加熱1～2min，冷卻到室溫，待甲酯化用。加入2mol／L鹽酸甲醇溶液2mL，充分振蕩10min，并于50℃加熱2min，棄去下層液體，再加約2mL蒸餾水洗凈并去除水層，用滴管吸出正己烷層，移至另一裝有無水硫酸鈉的漏斗中脫水，脫水后的溶液在70℃水浴上加熱濃縮，定容至1mL，待上機分析。
　　
　　1．4．1．2色譜條件
　　
　　PEG-20M毛細管脂肪酸分析柱(30m×0.53mmx1um)，氫離子火焰檢測器(FID)溫度220攝氏度，進樣口溫度210℃，柱溫185攝氏度，載氣(He)流速6．0mL／min，氫氣流速40mL／min，空氣流速400mL／min。
　　
　　1．4．2GB／T17377測定海藻油及DHA調(diào)和油中的DHA含量
　　
　　1．4．2．1前處理
　　
　　稱取350mg油樣加人50mL燒瓶中，移取6mL0．5mol／L氫氧化鈉甲醇溶液于油樣中，并加入幾粒沸石，連接回流裝置，開始加熱回流，回流過程中不斷搖動燒瓶；當燒瓶內(nèi)油珠消失，溶液變得透明時，從冷凝器上端加7mL15％三氟化硼甲醇溶液于燒瓶內(nèi)，繼續(xù)回流1min；然后從冷凝管上端加入4mL異辛烷，再回流1min；撤離熱源，取出燒瓶，向燒瓶中加入5mL飽和氯化鈉溶液，輕輕上下顛倒數(shù)次后，靜置分層；將異辛烷提取物集中在一起，并加入適量的無水硫酸鈉以去除痕量的水分，濃縮至1mL，待上機分析。
　　
　　1．4．2．2色譜條件
　　
　　聚酯毛細管色譜柱(30 m × 0.53 mm x 1 um)，氫離子火焰檢測器(FID)溫度230攝氏度，進樣口溫度210℃，柱溫180℃，載氣(He)流速5．0mL／min，氫氣流速70mL／min，空氣流速400ml/min。
　　
　　1．4．3 AOCS Official Method Ce lb-89測定海藻油及DHA調(diào)和油中的DHA含量
　　
　　1．4．3．1前處理
　　
　　精確稱取約25mg的C23:0甲酯內(nèi)標物于25mL容量瓶，然后用異辛烷定容，吸取1mL的內(nèi)標液加入試管中并把溶劑蒸發(fā)，將試管冷凍保藏(不立即使用時)；精確稱取25mg油樣加入含有內(nèi)標物的試管，添加1．5mL0．5mol／L氫氧化鈉甲醇溶液，蓋緊蓋子，振搖并加熱到100℃保持5min；冷卻，添加2mL15％三氟化硼甲醇溶液，充氮保護，蓋緊蓋子，振搖并加熱到100℃保持30min；冷卻到30～40，添加1mL異辛烷，充氮保護，加蓋，振搖或者激烈搖晃30S；立即加人5mL飽和氯化鈉溶液，充氮，加蓋并激烈振搖；冷卻到室溫，當異辛烷層和水層分離后，將異辛烷層轉(zhuǎn)移到干凈的試管中，充氮，加蓋；再用1mL異辛烷提取水相；將異辛烷提取液集中在一起，濃縮至1mL，待上機分析。
　　
　　1．4．3．2色譜條件
　　
　　Supercowax-10毛細管脂肪酸分析柱(30 m x 0.32 mm x 0.25 m)；氫離子火焰檢測器(FID)溫度270℃；進樣口溫度250攝氏度，柱箱起始溫度170攝氏度，保持0min，程序升溫至225℃，保持0min，升溫速率1.0攝氏度／min；載氣(He)流速6．0mL／min，氫氣流速40mL／min，空氣流速400ml/min。
　　
　　2結(jié)果與討論
　　
　　2．1 3種方法測定海藻油中的DHA
　　
　　對海藻油進行脂肪酸檢測，由于海藻油中DHA含量較高，3種方法都能比較準確地檢測DHA的含量，經(jīng)檢測海藻油中DHA含量為36．6％～37．1％(見表1)，與Martek提供的數(shù)據(jù)一致。圖1為采用GB／T5009．168方法檢測海藻油中DHA含量的色譜圖。

　　2．23種方法測定調(diào)和油中的DHA
　　
　　圖2為GB／T5009．168方法檢測的色譜圖。圖2可見，可以檢測到DHA峰，DHA調(diào)和油中DHA由出峰時間為29．212min，峰分離情況良好。

　　
　　圖3為GB／T17377方法檢測的色譜圖。由圖3可見，圖中沒有檢測到DHA峰。實驗發(fā)現(xiàn)，反復進樣，仍然檢測不到DHA，說明該方法不適用于DHA含量較低樣品的檢測。

　　
　　圖4為AOCS Official Method Ce lb-89法測定DHA調(diào)和油中DHA含量的色譜圖。由圖4可知，DHA調(diào)和油中DHA的出峰時間為29．531min。實驗發(fā)現(xiàn)，測定穩(wěn)定性較差，該法采用內(nèi)標法，操作程序較為麻煩，尋找合適的內(nèi)標物也很困難。因此，該方法不用于DHA含量低的DHA食用調(diào)和油的檢測。

　　
　　綜上所述，對于DHA含量較高的海藻油，3種方法都能比較準確地檢測DHA含量，而對于DHA含量較低的DHA食用調(diào)和油，GB／T17377方法未能有效檢測到DHA，而AOCS Official Method Ce 1b-89法穩(wěn)定性較差，并采用內(nèi)標法，操作程序較為麻煩，尋找合適的內(nèi)標物也很困難。因此，選擇GB／T5009．168方法作為DHA食用調(diào)和油中DHA含量的檢測方法，該法峰分離情況良好，采用外標法，操作簡便、易行、安全。
　　
　　2．3DHA標準曲線的建立
　　
　　根據(jù)GB／T5009．168方法，采用DHA作為標準品進行分析檢測，以DHA質(zhì)量濃度為橫坐標，相應(yīng)的峰面積為縱坐標，得到標準曲線，見圖5。

　　
　　DHA標準曲線方程為：Y=926 263X-23140，R2=0.9998該標準曲線在DHA含量為(0～1.0)×10mg／kg范圍內(nèi)線性良好。
　　
　　2．4測定DHA調(diào)和油中DHA的含量
　　
　　根據(jù)GB／T5009．168方法，參照標準曲線，測定調(diào)和油中的DHA含量。結(jié)果表明，調(diào)和油中DHA含量測定結(jié)果在190-210mg／kg之間，在誤差范圍之內(nèi)，并經(jīng)反復驗證，對于不同范圍低含量的DHA食用調(diào)和油，可準確檢測其DHA含量，檢測結(jié)果準確可靠。
　　
　　3結(jié)論
　　
　　對GB／T5009．168、GB／T17377、AOCS Official Method Ce lb-89測定方法比較可以看出，對于DHA含量較高的海藻油，3種方法均能準確檢測出其中的DHA含量；而對于DHA含量較低的DHA食用調(diào)和油，GB／T5009．168方法則準確可靠，重復性好，并且采用外標測定法，相對比較簡單易操作，能較好地滿足DHA食用調(diào)和油中低含量的DHA檢測需求