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隨著我國油脂產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展，市場上出現(xiàn)了一些新型調(diào)和油，DHA食用調(diào)和油產(chǎn)品在市場上迅速推廣并且在消費(fèi)者中得到廣泛認(rèn)可，與產(chǎn)品得到迅速發(fā)展形成鮮明對比的是，相關(guān)DHA食用調(diào)和油產(chǎn)品的DHA含量檢測方法卻處于停滯狀態(tài)。因此，開展對DHA食用調(diào)和油中DHA含量檢測方法的研究，可進(jìn)一步規(guī)范和服務(wù)DHA食用調(diào)和油的發(fā)展。目前國內(nèi)外測定油中DHA的常用色譜方法分為內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法。國標(biāo)方法如GB／T5009．168-2003(食品中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的測定)、GB／T17377-2008(動植物油脂脂肪酸甲酯的氣相色譜分析)、GB／T5413．27—2010(嬰幼兒配方食品和乳粉DHA、EPA的測定)等均采用外標(biāo)法。國際上測定DHA的方法如AOCSOmcialMethodCe1b-89(用氣液色譜法測定海洋魚油中脂肪酸組成)、AOACOficialMethod991．39(氣相色譜法微膠囊魚油和甲酯、乙酯魚油中脂肪酸的測定)、AOACOficialMethod996．06(食品中脂肪酸的測定)等均采用內(nèi)標(biāo)法來測定DHA或其他脂肪酸含量。
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本文采用氣相色譜法測定海藻油和DHA調(diào)和油中DHA的含量，并將GB／T5009．168、AOCSOfficialMethodCe1b-89和GB／T173773種方法測定結(jié)果進(jìn)行對比，以期找出最合適的DHA含量測定方法。
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1材料與方法
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1．1實(shí)驗材料
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DHA標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99％)、c23:0甲酯標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99％)：購自成都博奧生物科技公司；海藻油(DHA含量37．0％)：MartekBiosciencesCorporationColumbia，USA；DHA調(diào)和油：自制；正己烷、甲醇、氫氧化鈉、氯化鈉、異辛烷、無水硫酸鈉、鹽酸，均為分析純。
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1．2實(shí)驗設(shè)備
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島津GC一2010Plus氣相色譜儀，R一201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，SHB—B95型循環(huán)水式多用真空泵，SartoriusBS224S分析天平。
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1．3實(shí)驗方法
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以海藻油為原料調(diào)配DHA調(diào)和油，首先根據(jù)海藻油中DHA的含量，調(diào)配出DHA含量為200mg／kg的食用調(diào)和油，以此進(jìn)行DHA檢測方法的研究。
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1．4測定方法
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1．4．1GB／T5009．168測定海藻油及DHA調(diào)和油中的DHA含量
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1．4．1．1前處理
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稱取1g油樣于50mL具塞容量瓶中，加人10mL正己烷輕搖使油樣溶解。吸取此溶液1～5mL于具塞比色管中，加入2mol／L氫氧化鉀甲醇溶液1mL，充分振蕩10rain后放人60℃水浴加熱1～2rain，冷卻到室溫，待甲酯化用。加入2mol／L鹽酸甲醇溶液2mL，充分振蕩10min，并于50℃加熱2min，棄去下層液體，再加約2mL蒸餾水洗凈并去除水層，用滴管吸出正己烷層，移至另一裝有無水硫酸鈉的漏斗中脫水，脫水后的溶液在70℃水浴上加熱濃縮，定容至1mL，待上機(jī)分析。
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1．4．1．2色譜條件
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PEG一20M毛細(xì)管脂肪酸分析柱(30m×0．53mmx1m)，氫離子火焰檢測器(FID)溫度220℃，進(jìn)樣口溫度210℃，柱溫185℃，載氣(He)流速6．0mL／min，氫氣流速40mL／min，空氣流速400mL／min。
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1．4．2GB／T17377測定海藻油及DHA調(diào)和油中的DHA含量
1．4．2．1前處理
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稱取350mg油樣加人50mL燒瓶中，移取6mL0．5mol／L氫氧化鈉甲醇溶液于油樣中，并加入幾粒沸石，連接回流裝置，開始加熱回流，回流過程中不斷搖動燒瓶；當(dāng)燒瓶內(nèi)油珠消失，溶液變得透明時，從冷凝器上端加7mL15％三氟化硼甲醇溶液于燒瓶內(nèi)，繼續(xù)回流1min；然后從冷凝管上端加入4mL異辛烷，再回流1min；撤離熱源，取出燒瓶，向燒瓶中加入5mL飽和氯化鈉溶液，輕輕上下顛倒數(shù)次后，靜置分層；將異辛烷提取物集中在一起，并加入適量的無水硫酸鈉以去除痕量的水分，濃縮至1mL，待上機(jī)分析。
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1．4．2．2色譜條件
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聚酯毛細(xì)管色譜柱(30m×0．53mm×1μm)，氫離子火焰檢測器(FID)溫度230℃，進(jìn)樣口溫度210℃，柱溫180℃，載氣(He)流速5．0mL／min，氫氣流速70mL／min，空氣流速400ml/min。
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1．4．3AOCSOficialMethodCelb一89測定海藻油及DHA調(diào)和油中的DHA含量
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1．4．3．1前處理
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精確稱取約25mg的C23:0甲酯內(nèi)標(biāo)物于25mL容量瓶，然后用異辛烷定容，吸取1mL的內(nèi)標(biāo)液加入試管中并把溶劑蒸發(fā)，將試管冷凍保藏(不立即使用時)；精確稱取25mg油樣加入含有內(nèi)標(biāo)物的試管，添加1．5mL0．5mol／L氫氧化鈉甲醇溶液，蓋緊蓋子，振搖并加熱到100℃保持5min；冷卻，添加2mL15％三氟化硼甲醇溶液，充氮保護(hù)，蓋緊蓋子，振搖并加熱到100℃保持30min；冷卻到30～40℃，添加1mL異辛烷，充氮保護(hù)，加蓋，振搖或者激烈搖晃30S；立即加人5mL飽和氯化鈉溶液，充氮，加蓋并激烈振搖；冷卻到室溫，當(dāng)異辛烷層和水層分離后，將異辛烷層轉(zhuǎn)移到干凈的試管中，充氮，加蓋；再用1mL異辛烷提取水相；將異辛烷提取液集中在一起，濃縮至1mL，待上機(jī)分析。
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1．4．3．2色譜條件
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Supercowax一10毛細(xì)管脂肪酸分析柱(30m×0．32mm×0．25μm)；氫離子火焰檢測器(FID)溫度270℃；進(jìn)樣口溫度250；柱箱起始溫度170℃，保持0min，程序升溫至225℃，保持0min，升溫速率1．0℃／min；載氣(He)流速6．0mL／min，氫氣流速40mL／min，空氣流速400ml/min。
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2結(jié)果與討論
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2．1 3種方法測定海藻油中的DHA
對海藻油進(jìn)行脂肪酸檢測，由于海藻油中DHA含量較高，3種方法都能比較準(zhǔn)確地檢測DHA的含量，經(jīng)檢測海藻油中DHA含量為36．6％～37．1％(見表1)，與Martek提供的數(shù)據(jù)一致。圖1為采用GB／T5009．168方法檢測海藻油中DHA含量的色譜圖。
2．2 3種方法測定調(diào)和油中的DHA
圖2為GB／T5009．168方法檢測的色譜圖。由圖2可見，可以檢測到DHA峰，DHA調(diào)和油中DHA由出峰時間為29．212min，峰分離情況良好。
圖3為GB／T17377方法檢測的色譜圖。由圖3可見，圖中沒有檢測到DHA峰。實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，反復(fù)進(jìn)樣，仍然檢測不到DHA，說明該方法不適用于DHA含量較低樣品的檢測。
圖4為AOCSOfficialMethodCelb一89法測定DHA調(diào)和油中DHA含量的色譜圖。由圖4可知，DHA調(diào)和油中DHA的出峰時間為29．531min。實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，測定穩(wěn)定性較差，該法采用內(nèi)標(biāo)法，操作程序較為麻煩，尋找合適的內(nèi)標(biāo)物也很困難。因此，該方法不適用于DHA含量低的DHA食用調(diào)和油的檢測。
綜上所述，對于DHA含量較高的海藻油，3種方法都能比較準(zhǔn)確地檢測DHA含量，而對于DHA含量較低的DHA食用調(diào)和油，GB／T17377方法未能有效檢測到DHA，而AOCSOfficialMethodCe1b一89法穩(wěn)定性較差，并采用內(nèi)標(biāo)法，操作程序較為麻煩，尋找合適的內(nèi)標(biāo)物也很困難。因此，選擇GB／T5009．168方法作為DHA食用調(diào)和油中DHA含量的檢測方法，該法峰分離情況良好，采用外標(biāo)法，操作簡便、易行、安全。
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2．3DHA標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
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根據(jù)GB／T5009．168方法，采用DHA作為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行分析檢測，以DHA質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖5。
DHA標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=926263X一23140．R2=0．9998
該標(biāo)準(zhǔn)曲線在DHA含量為(0～1．0)×103mg／kg范圍內(nèi)線性良好。
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2．4測定DHA調(diào)和油中DHA的含量
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根據(jù)GB／T5009．168方法，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定調(diào)和油中的DHA含量。結(jié)果表明，調(diào)和油中DHA含量測定結(jié)果在190-210mg／kg之間，在誤差范圍之內(nèi)，并經(jīng)反復(fù)驗證，對于不同范圍低含量的DHA食用調(diào)和油，可準(zhǔn)確檢測其DHA含量，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
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3結(jié)論
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對GB／T5009．168、GB／T17377、AOCSOficialMethodCelb一89測定方法比較可以看出，對于DHA含量較高的海藻油，3種方法均能準(zhǔn)確檢測出其中的DHA含量；而對于DHA含量較低的DHA食用調(diào)和油，GB／T5009．168方法則準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，并且采用外標(biāo)測定法，相對比較簡單易操作，能較好地滿足DHA食用調(diào)和油中低含量的DHA檢測需求。
